西湖大学利用生物分子凝聚体递送Cas9-RNP复合物，实现小鼠原代细胞的高效基因编辑

小鼠原代免疫细胞的精准基因编辑可直接操控免疫关键分子，实现功能与信号通路的快速验证，在保留细胞生理特性的同时避免了耗时的转基因动物构建。然而，这一研究利器长期受困于技术瓶颈——传统的慢病毒、电穿孔和脂质体转染系统在递送 Cas9/sgRNA 核糖核蛋白（Cas9-RNP）复合物时效率低下，且严重损伤细胞活力。

西湖凝聚体与西湖大学联合开发的 ProteanFect CRISPRMax Ultra 小鼠免疫细胞转染试剂盒，通过创新的生物分子凝聚体技术，递送 sgRNA 与重组 Cas9 蛋白 RNP 进入小鼠免疫细胞并实现高效基因编辑，为免疫学研究提供了突破性解决方案。同时，整个过程简单高效，且无需 sgRNA-Cas9 提前孵育，使原代免疫细胞转染像 HEK293 细胞系一样容易！

ProteanFect CRISPRMax Ultra 基因编辑机制

ProteanFect 递送系统实现基因编辑的分子机制如下（图1）：

1、Cas9 蛋白、sgRNA与 ProteanFect 内源蛋白一起组装成为 Cas9 RNP-凝聚体复合物；

2、Cas9 RNP 通过 Proteanfect 递送进入细胞内；

3、Cas9 RNP 复合物被 Proteanfect 释放并进入细胞核与靶 DNA 结合；

4、精准切割靶基因，实现高效基因编辑。

这种递送策略极大避免了电穿孔等物理方法对细胞膜的损伤，以及病毒载体可能引起的免疫原性问题，同时实现了比直接递送 RNP 蛋白更高的编辑效率。

图1. ProteanFectCRISPRMax Cas9RNP递送原理

ProteanFect CRISPRMax Ultra递送系统：效率与细胞活性的平衡

✅ 无需预组装，凝聚体作为高效生物反应器，制备过程中，一分钟之内即可完成快速组装；

✅ 无需入胞后翻译成蛋白，快速进入后直接进行基因编辑；

✅ 不依赖于持续激活，能保持稳定的编辑效率；

✅ 高效实现小鼠原代T细胞、NK细胞、γδ T细胞、Treg细胞等免疫细胞的基因编辑。

实验数据：小鼠原代T细胞中的超高效基因编辑

ProteanFect CRISPR Ultra 小鼠免疫细胞转染试剂盒对小鼠原代 T 细胞进行基因编辑：采用 TracsgRNA/Cas9 RNP 转染的方案，结果如下图1所示。基因组水平检测（图2左）显示小鼠 T 细胞整体 Trac 敲除率达93.0%，蛋白水平检测（图2右）显示 Trac 敲除效率达83.5%。

图2. 使用ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠免疫细胞转染试剂盒对小鼠原代T细胞进行基因编辑

突破传统：ProteanFect CRISPRMax Ultra与其他CRISPR方法对比

表1. ProteanFect与传统CRISPR方法对比

全球首创：基于生物分子凝聚体的分子递送技术

ProteanFect 凝聚体技术：ProteanFect CRISPRMax 采用了一种创新的生物分子凝聚体技术：ProteanFect蛋白分子能够在体外与核酸、蛋白等自组装成高度规律的球体结构，这种自组装而成的ProteanFect-核酸/蛋白复合物能够通过细胞的主动摄入高效进入细胞内，迅速释放核酸分子，实现基因表达，同时天然降解其余蛋白。

图3. ProteanFect核酸递送原理示意图(以递送核酸为例)

素材来源官方媒体/网络新闻

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