脑声常谈丨斑马鱼行为篇：斑马鱼雌性繁殖偏好测试

斑马鱼是一种常用的模式生物，在行为学和生殖生物学研究中具有重要地位。

偏好测试实验装置主要由玻璃鱼缸、矩形挡板和透明圆柱筒组成。用矩形挡板将装置分成雄性刺激鱼区、受试鱼区、雌性刺激鱼区等3个区域;在受试鱼区底部划线将该区再均分为偏好雄鱼区、启动区、偏好雌鱼区等3个区域，在启动区正中放置透明圆柱筒。此外，实验装置底部及四周用白色不透明壁纸遮挡以防止外界环境对其中的斑马鱼造成视觉干扰。

对照组实验装置的矩形挡板为透明且有微孔，偏好测试实验开始后受试雌鱼与刺激鱼之间既能通过视觉观察对方的运动状态，又能通过各区域之间的水体流动进行嗅觉信号交流。嗅觉组实验装置的矩形挡板也为透明有微孔，但附有白色不透明软板;偏好测试实验开始时在雌、雄性刺激鱼区上方各固定1组袋式输液器，通过输液器向2个区域内分别放入含雌、雄性信息素的嗅觉刺激源，同时区域内不放入刺激鱼，受试雌鱼只能通过嗅觉系统识别嗅觉刺激源。视觉组实验装置的矩形挡板为透明无孔，受试雌鱼与刺激鱼之间只能通过视觉信号交流。摄像机位于实验装置正上方50cm处。实验开始前，在上述鱼缸中加入同等高度(15cm)的脱氯自来水。

偏好测试实验

在偏好测试实验开始前一日制备用于嗅觉组实验的嗅觉刺激源，即雌鱼或雄鱼活动24h后的饲养水。外，斑马鱼的繁殖行为需要在清晨予以光照刺激，因此在进行10h的暗处理后，于次日清晨8:00(即偏好测试实验开始)开灯以刺激斑马鱼进入繁殖期。斑马鱼繁殖期持续时间大约2h，因此实验视频拍摄时间段为8:00-10:00。随机挑选雌、雄性刺激鱼各10尾分别放入对照组或视觉组的刺激鱼区，同时在嗅觉组雌、雄性刺激鱼区上方固定分别装有含雌、雄性信息素饲养水的袋式输液器。随机挑选1尾受试雌鱼置于透明圆柱筒内，适应5min后，将嗅觉组实验装置中附在矩形挡板上的白色不透明软板抽出，同时开启嗅觉组输液器的流速调节器并将出水流速设为50mL·min-1。受试雌鱼适应2min后撤去透明圆柱筒，拍摄行为视频10min。拍摄结束后，将受试雌鱼放入其他鱼缸养殖但不再使用。刺激鱼则放回原缸中经驯养后继续试验。为防止受试雌鱼的繁殖偏好出现随机性，两侧刺激鱼的位置随机交换3次，受试雌鱼行为视频也重复拍摄3次。

统计指标

停留在各偏好区的频次(后简称停留频次)、撞击各偏好区的缸壁频次(后简称撞壁频次)、停留在各偏好区的时间(后简称停留时间)和最长停留时间。计算雌性斑马鱼在每个区域停留的总时间和平均停留时间，以及与不同雄性斑马鱼互动行为的次数和频率。

参考文献：

符金凤，汪春玲，刘智皓.斑马鱼雌性在繁殖期对雄性的视觉和嗅觉性偏好[J].重庆师范大学学报(自然科学版)，2024，41(06):21-26.

SUMNER I T，TRAVIS J，JOHNSON C D.Methods of female fertility advertisement and variation among males in responsiveness in the sailfin molly (Poecilia latipinna)[J].Copeia，1994:27-34.

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