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脑声常谈丨小鼠增殖性玻璃体视网膜病变模型

2025-03-18 11:28
上海
来源:澎湃新闻·澎湃号·湃客
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本研究旨在通过玻璃体腔注射药物的方法,建立稳定且可重复的小鼠增殖性玻璃体视网膜病变(proliferativevitreoretinopathy,PVR)模型。

实验选用48只6周龄健康雄性C57BL/6J小鼠,经外眼、前节及眼底检查确认无异常。小鼠在符合医学实验动物环境标准的眼科实验室动物房内适应性饲养3天后,随机分为4组(n=12):正常对照组、PBS对照组、Dispase+RPE实验组和PDGF+RPE实验组。

PVR的发生机制涉及视网膜色素上皮(RPE)细胞在多种因素作用下发生去分化,转化为成纤维细胞或巨噬细胞样细胞,进而形成纤维增殖膜,最终导致视网膜牵拉。基于此,本实验采用DispaseⅡ(一种来源于多粘芽孢杆菌的非特异性中性金属蛋白酶)和PDGF-BB(血小板衍生生长因子)分别与ARPE-19细胞联合应用建立模型。具体操作如下:以小鼠左眼为实验眼,在手术显微镜下,经角巩膜缘下1mm处使用33G微量注射器进行玻璃体腔注射。正常对照组不作处理;PBS对照组注射1μL PBS缓冲液;Dispase+RPE组注射1μL DispaseⅡ与ARPE-19细胞混悬液;PDGF+RPE组注射1μL PDGF-BB与ARPE-19细胞混悬液。术后给予抗生素眼膏预防感染,并注意保温。

实验过程中,分别于术后第7、14、21、28天进行系统观察。每次观察前,小鼠经2.5% Avertin(0.01mL/g)腹腔注射麻醉,复方托吡卡胺散瞳,碘伏消毒眼周。采用小动物视网膜显微成像系统进行眼底照相和OCT检查,详细记录眼表、玻璃体腔及视网膜的病理变化。PVR分级评估采用定量分析方法,以各时间点的病变级别与相应眼数的乘积之和除以总眼数,计算平均增生程度,从而动态监测PVR进展。

本实验方案严格遵循动物实验伦理规范,所有操作均在无菌条件下进行,最大程度确保实验结果的可靠性和可重复性。通过系统观察不同时间点的病理变化,可为PVR的发病机制研究和治疗策略探索提供可靠的动物模型。

实验结果

1. 一般情况

所有实验小鼠在观察期间均保持健康状态,进食和精神状况正常。术后第7天,Dispase+RPE组中1只小鼠出现角膜白斑,该样本被排除在后续分析之外。其余小鼠的眼表观察显示,角巩膜缘创口愈合良好,未发现炎症或异常分泌物,角膜保持透明,无溃疡或糜烂等异常。

2. OCT及眼底照相结果

正常组与PBS组:在整个观察期间,玻璃体保持透明,视网膜平伏,眼底血管清晰可见,视网膜各层结构正常,未发现异常病变。

Dispase+RPE组:

第7天:除1只小鼠因角膜白斑被排除外,其余小鼠的眼底照相和OCT检查显示玻璃体腔出现轻度积血混浊,局部可见色素颗粒和增生条索,少量视网膜前膜及视网膜褶皱。PVR分级为1级(1只)、2级(6只)、3级(4只),平均增生程度为2.3。

第14天:玻璃体腔积血逐渐吸收,但出现大量色素颗粒和致密棉花团样增生条索,视网膜血管僵硬,部分视网膜前膜及浅脱离可见。PVR分级为2级(2只)、3级(3只)、4级(3只),平均增生程度为3.1。

第21天:玻璃体腔呈现致密白色混浊,眼底难以窥清,OCT显示部分视网膜脱离。PVR分级为4级(3只)、5级(2只),平均增生程度为4.4。

第28天:眼底混浊进一步加重,OCT显示视网膜大面积脱离和隆起。PVR分级为5级(1只)、6级(1只),平均增生程度为5.5。

3. 结果分析

Dispase+RPE组在造模后表现出快速的PVR进展,早期即出现视网膜浅脱离。各时间点均存在玻璃体腔混浊和眼底窥不清的问题,这为疾病的早期观察和分析带来了困难。尽管如此,该模型成功模拟了PVR的典型病理特征,包括玻璃体混浊、视网膜前膜形成及视网膜脱离,为进一步研究PVR的发病机制和治疗策略提供了可靠的实验基础。

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