Cancer Cell：曹雪涛团队利用CRISPR筛选，发现克服乳腺癌免疫治疗耐药新靶点

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撰文丨王聪

编辑丨王多鱼

排版丨水成文

免疫检查点阻断（ICB）疗法显著改善了恶性肿瘤患者的预后。然而，大多数癌症患者却几乎不能从ICB治疗中获益。破译ICB耐药机制，特别是肿瘤细胞内在因子介导的免疫逃逸，将有助于提高ICB疗效。

ICB治疗耐药是由多种因素导致的，包括特定肿瘤基因突变、肿瘤抗原下调、免疫抑制分子以及肿瘤微环境（TME）等。许多研究人员致力于探索肿瘤免疫逃逸机制，克服对现有免疫疗法的耐药，以及开发新的肿瘤免疫疗法。

三阴性乳腺癌（TNBC）是最具侵袭性的乳腺癌亚型，复发率高，预后差。此外，TNBC是一种异质性疾病，对免疫治疗通常无反应。TNBC对免疫治疗耐药的机制复杂，包括抗原呈递受损导致的低免疫原性和免疫抑制分子升高（例如PD-L1）。

靶向肿瘤内在因子增强肿瘤免疫原性，重编程肿瘤微环境（TME），尤其是CD8+T细胞，使“冷”肿瘤变为“热”肿瘤，是克服TNBC免疫治疗耐药的理想策略。但关于提高TNBC肿瘤细胞免疫原性的研究仍然有限，为了协同免疫治疗，有必要揭示增加肿瘤免疫原性的新的肿瘤内在因素。

2024年12月12日，曹雪涛院士团队在 Cancer Cell 期刊发表了题为：Inhibiting intracellular CD28 in cancer cells enhances antitumor immunity and overcomes anti-PD-1 resistance via targeting PD-L1 的研究论文。

该研究通过在三阴性乳腺癌（TNBC）小鼠模型中进行的体内全基因组CRISPR筛选，发现癌细胞内CD28可直接与Cd274 mRNA结合，招募剪接因子SNRPB2以增强Cd274 mRNA稳定性，促进肿瘤细胞PD-L1表达，进而实现肿瘤免疫逃逸，靶向抑制瘤细胞内CD28能够克服对PD-1抗体治疗的耐药性。

这些结果表明，抑制肿瘤细胞胞内CD28，能够通过靶向PD-L1增强抗肿瘤免疫并克服抗PD-1耐药，为改善乳腺癌免疫治疗提供了一条潜在新途径。

体内全基因组CRISPR筛选已经发现了多种癌症中调节耐药性或免疫治疗敏感性的靶点。例如，体内基因筛选揭示了黑色素瘤细胞中的Ptpn2基因缺失可通过增强抗原呈递使肿瘤对PD-1抑制剂敏感。因此，体内全基因组CRISPR筛选可以识别新靶点，以提高免疫治疗效率。

T细胞活化需要两个信号：T细胞受体（TCR）识别抗原呈递细胞（APC）上负载多肽的MHC分子，以及共刺激信号。

CD28是一种经典的共刺激分子，组成性表达于小鼠T细胞、约80%的人CD4+T细胞和50%的人CD8+T细胞表面。CD28的常规功能是启动与B7配体结合后T细胞内的共刺激信号级联。CD28通常被认为维持T细胞的存活、增殖和向特定T细胞亚群分化。值得注意的是，CD28还通过翻译后修饰和表观遗传改变调节T细胞的分化和功能。

然而，CD28在非T细胞免疫细胞、间质细胞甚至肿瘤细胞中的潜在作用尚不清楚。

在这项最新研究中，研究团队在三阴性乳腺癌（TNBC）小鼠模型中进行了体内全基因组CRISPR筛选，发现癌细胞内的CD28通过招募SNRPB2来促进Cd274 mRNA的稳定性，从而上调PD-L1的表达。敲低肿瘤细胞中Cd28可激活抗肿瘤CD8+T细胞，抑制肿瘤生长，并克服抗PD-1耐药。

具体来说，该研究在三阴性乳腺癌（TNBC）小鼠模型中进行了体内全基因组CRISPR功能缺失筛选，发现了Cd28在肿瘤细胞中促进免疫逃逸的非经典功能。在肿瘤细胞中敲除Cd28增加了I型常规树突状细胞（cDC1）和活化的肿瘤特异性CD8+T细胞的浸润，在体内，药理学诱导的Cd28敲低抑制了预先建立的肿瘤生长，克服了抗PD-1的耐药性。此外，TNBC组织中CD28高表达与PD-L1表达升高、CD8+T细胞浸润减少及不良预后相关。

从机制上来说，肿瘤细胞内的CD28可以直接与Cd274 mRNA结合，招募剪接因子SNRPB2进入细胞核以稳定Cd274 mRNA，进而促进肿瘤细胞的PD-L1表达并实现肿瘤免疫逃逸。

因此，干扰肿瘤细胞CD28介导的免疫逃逸，为改善乳腺癌免疫治疗提供了一条潜在新途径。

论文链接：

https://www.cell.com/cancer-cell/abstract/S1535-6108(24)00443-4

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