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单细胞多组学揭示狼疮肾炎肾脏中存在活跃的滤泡外B细胞和颗粒酶K阳性CD8 T细胞应答

2024-10-24 11:32

来源：澎湃新闻·澎湃号·湃客

主要发现

近日，BMJ旗下Annals of the Rheumatic Diseases期刊在线发表了由上海交通大学医学院附属仁济医院风湿科扶琼主任团队与中科院上海免疫与感染研究所张晓明教授团队合作，题为《Single-cell transcriptomics reveal potent extrafollicular B cell response linked with GZMK+ CD8 T cell activation in lupus kidney》的研究。该研究通过单细胞多组学技术，首次发现狼疮肾炎（LN）患者肾脏组织局部存在活跃的B细胞滤泡外免疫应答，这与其邻近的颗粒酶K阳性CD8 T细胞在肾组织内的高度浸润和活化密切相关，揭示了LN肾脏中的致病性免疫微环境，为LN靶向治疗提供了新的方向。

原文献信息：

文章解读

系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多系统多器官的自身免疫性疾病，好发于中青年女性。肾脏是SLE最常累及的器官之一，高达三分之二的SLE患者会在发病5年内出现LN临床表现，而在LN诊断后的10年内，5-30%的患者将最终发展为终末期肾脏病。LN的核心发病机制目前尚未阐明，探索基于LN具体发病机理的靶向精准治疗，是当前风湿领域的重点研究方向。

SLE的核心特征之一是B细胞的过度活化和多种自身抗体的产生。B细胞可通过生发中心途径或滤泡外途径分化为抗体分泌细胞（ASCs），一般认为活动性SLE患者体内存在活跃的滤泡外抗体应答，但应答场所未知。研究发现LN肾脏中存在浸润的B、T细胞和ASCs，形成三级淋巴结构（TLS），但这些TLS中往往缺乏生发中心，提示LN肾脏局部可能存在活跃的滤泡外抗体应答。然而由于人类样本来源的稀缺和技术的局限性，目前尚无直接证据证实这一假说。

该研究首先通过单细胞测序（scRNA-seq）和单细胞免疫组库测序技术（scBCR/TCR-seq）对6例LN患者肾脏穿刺标本和配对外周血进行检测，首次从分子水平证实了LN肾脏存在以年龄相关B细胞（ABCs；又称为非典型记忆B细胞，AtMs）和ASCs为特征的滤泡外免疫应答，具体表现在：LN肾组织存在大量ABCs和ASCs，且ABCs和ASCs之间存在潜在的分化联系；与外周ASCs相比，肾脏ASCs存在以IGHG1和IGHG3型为主的克隆扩增，而克隆多样性明显下降，且肾脏ASCs基因突变频率明显降低；存在肾脏特异性BCR克隆，其中相当一部分序列属于IGHV4-59家族。在T细胞方面，结合流式细胞术和免疫组化技术，发现颗粒酶K阳性（GZMK+）CD8 T细胞是在LN肾脏浸润程度最高的CD8 T细胞亚群；其在肾脏中的浸润程度与LN病情严重程度和不良预后密切相关，提示GZMK+ CD8 T细胞可能是介导LN肾脏损伤的核心T细胞亚群。进一步分析提示LN肾组织GZMK+ CD8 T细胞与ABCs在肾脏中的浸润程度正相关，两群细胞共同参与形成肾脏TLS，并且炎症、应激等通路在这两群细胞中均发生了高度活化。肾脏GZMK+ CD8 T细胞高表达IFNG，存在高度活化的II型干扰素通路，体外功能实验发现该群细胞可通过分泌IFN-γ和IL-21促进ABCs的分化。