有效抑制肝癌进展，复旦大学发文：关于肝癌免疫治疗的新见解

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【导读】肿瘤免疫微环境与肝细胞癌（HCC）的恶性行为密切相关。然而，HCC中B细胞的免疫功能和调节机制尚不清楚。

10月18日，复旦大学研究团队在期刊《Advanced Science》上发表了研究论文，题为“Increased PRP19 in Hepatocyte Impedes B Cell Function to Promote Hepatocarcinogenesis”，本研究中，研究人员对高和低B细胞浸润的HCC样本的表达差异进行了探索，以识别关键调节因子。研究发现，抑制PRP19表达促进了肿瘤组织中B细胞浸润，并阻碍了HCC的生长。机制上，共免疫沉淀（Co-IP）实验揭示，PRP19与DDX5相互作用，导致DDX5蛋白的泛素化和降解。减弱的DDX5会破坏CXCL12 mRNA的稳定性，通过CXCL12/CXCR4轴抑制B细胞招募和浆细胞分化。此外，在小鼠模型中，采用CXCR4+ B细胞的过继转移结合CXCL12治疗有效地抑制了HCC的发生，从而重塑了免疫反应。PRP19、DDX5和浸润B细胞的表达被认为是HCC患者的临床预后指标。总的来说，这项研究为HCC免疫治疗提供了有价值的见解，通过靶向PRP19并调节肿瘤浸润B细胞的免疫功能来改善临床疗效。

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202407517

背景信息

01

肝细胞癌（HCC）是肝癌最常见的类型，仍然是全球范围内的健康挑战。大多数HCC病例通常发生在炎症的肝脏、炎症状态和肿瘤微环境中的免疫反应，这可以显著影响恶性肿瘤的生物学行为。早期对免疫疗法的研究发现，由免疫细胞调节的抗肿瘤反应可以作为治疗实体或血液肿瘤的有效工具，尤其是对T细胞和巨噬细胞。在肿瘤微环境中，肿瘤浸润的B细胞是适应性免疫系统的关键组成部分，具有显著的功能多样性，包括抗原呈递细胞（APC）、细胞因子产生细胞和分泌抗体的浆细胞等不同亚群。进一步研究肿瘤微环境中的B细胞可能为调节免疫反应和对HCC进行有意义的治疗干预提供重要方法。

肿瘤浸润性B细胞的功能特征及其对肿瘤免疫的影响仍存在争议。在人类恶性肿瘤中，B细胞高度异质性，表现出不同的促肿瘤和抗肿瘤作用。早期研究报道CD20+ B细胞具有抗肿瘤特性；然而，调节性B细胞（Bregs）通过上调IL-10和TGF-β主要驱动肿瘤进展。在结直肠肿瘤中，研究人员发现了一种由亮氨酸代谢诱导的特殊B细胞亚群，即LARS B细胞，通过抑制B细胞线粒体NAD+再生和氧化代谢促进肿瘤免疫逃避。到目前为止，调节B细胞浸润和功能以促进肿瘤发展的关键因素尚未阐明。PRP19是PRP19相关复合物的关键成员，具有多种生物学功能，如DNA损伤响应、肿瘤放疗抵抗和蛋白质泛素化。然而，PRP19表达与HCC肿瘤微环境中B细胞功能之间的关系尚不清楚。

PRP19缺乏通过促进B细胞浸润抑制HCC进展

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为了深入了解PRP19在肝癌发生过程中B细胞功能中的作用，研究人员在体外建立了PRP19敲除小鼠肝癌细胞，并将对照组和PRP19敲除HCC细胞通过皮下注射注入小鼠体内。令人惊讶的是，研究人员观察到PRP19敲除组小鼠肿瘤体积更小，肿瘤生长速度更慢。流式细胞术显示PRP19敲除小鼠肝癌组织中B细胞水平更高。CD4+T、CD8+T和CD115+单核细胞在对照组和PRP19敲除组之间没有显著差异。PRP19免疫组织化学染色和B细胞标记CD20的免疫组化染色支持流式细胞术的结果。

PRP19缺乏促进B细胞浸润，抑制肝癌的进展

为了研究PRP19在调节B细胞迁移方面的作用，研究人员收集了外周血单个核细胞（PBMCs），并在体外与HCC细胞共培养。研究人员采用流式细胞术（FCM）研究招募的CD19+ B细胞比例。结果表明，与PRP19过表达的HCC细胞共培养时，B细胞的迁移倾向较差。然而，与PRP19敲除共培养组相比，招募的B细胞比例有所增加。此外，研究人员发现HCC细胞中PRP19表达的变化对T细胞的迁移能力没有影响。进一步在3D HCC球体中测量B细胞迁移能力，发现PRP19敲除HCC球体中B细胞的渗透率较高。接下来，研究人员探索了B细胞在HCC进展中的作用。首先，研究人员使用抗CD20抗体删除小鼠B细胞，并通过FCM确认了删除效果。此外，在B细胞删除和野生型小鼠中，使用对照和PRP19敲除Hepa1-6细胞构建了原位肝肿瘤模型。研究人员发现，与对照组相比，PRP19敲除抑制了小鼠HCC的发展。然而，B细胞的缺失削弱了PRP19敲除对小鼠肝癌发展的抗肿瘤作用。这些发现表明，在肝癌细胞中抑制PRP19可能会诱导B细胞浸润，阻碍肝细胞癌的发生，而B细胞的缺失会削弱PRP19抑制的肿瘤抑制作用。

HCC组织中PRP19、DDX5和CD20+B细胞水平相关，并可作为HCC患者的预后指标

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研究人员测量了120例来自中山医院的HCC样本中PRP19和DDX5的表达以及CD20+B细胞的浸润情况。根据H-评分，研究人员将HCC患者分为PRP19低表达、中等表达和高表达三组。PRP19低表达组患者的DDX5表达和CD20+B细胞浸润较高。然而，高PRP19表达的HCC患者的DDX5表达和CD20+B细胞浸润较低。相关性分析表明，PRP19在HCC患者中与DDX5表达呈负相关，而DDX5与CD20水平呈正相关。Kaplan-Meier生存分析显示，HCC患者中PRP19高表达预示总体生存率低和肿瘤复发率高。相反，DDX5水平低的患者术后临床预后不佳，复发率高，这与之前的研究一致。此外，研究人员发现PRP19和DDX5水平高的患者在四个组中预后最差。综合数据表明，PRP19通过调节DDX5和CXCL12的水平，在B细胞免疫功能障碍中发挥着关键作用，并且与HCC的不良预后存在临床相关性。

结论

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总之，本研究揭示了PRP19表达与HCC发生过程中B细胞功能之间的联系。通过DDX5介导的CXCL12-CXCR4轴，PRP19抑制促进B细胞招募以抑制HCC肿瘤发生。此外，研究人员阐明了在小鼠模型中，通过重塑TME，将CXCR4+B细胞的过继转移与CXCL12治疗相结合，可以有效抑制HCC发生。因此，本研究为通过靶向PRP19并调节B细胞免疫功能来治疗HCC提供了理论依据。

【参考资料】

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202407517

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