浅析啮齿动物抑郁疼痛共病模型构建与行为学评估

疼痛和抑郁两者相互调控、交互敏化，形成抑郁疼痛共病。模拟伴发躯体疼痛的抑郁症患者，采用慢性束缚应激(chronic restraint stress，CRS)模型，通过行为学检测来确定小鼠产生抑郁样行为后是否也会出现痛觉敏化。建立成熟的抑郁疼痛共病模型对未来研究相关机制非常必要。

CRS实验步骤：

CRS模型C57BL/6J小鼠随机分为CRS组和假手术(Sham)组。CRS组小鼠用异氟烷麻醉，放入打好小孔的50mL离心管中，拧紧后盖，确保小鼠无法逃离。将其放回原鼠笼内，每日束缚6h后恢复食水。Sham组小鼠在相同时间内去除小鼠食水，但小鼠可在原鼠笼中自由活动，6h后恢复食水，连续造模21、28、35d后进行行为学检测。

悬尾实验(tail suspension test，TST)

实验前1h将小鼠放入行为室适应，提前调节好行为室光照强度、悬尾装置及录像设备。实验时将小鼠尾巴末端用胶带固定使其悬挂，小鼠头部距装置底部20cm，录制视频6min，确保录制环境安静。每只小鼠测试完后用乙醇清洁装置底部，去除上只小鼠残留气味，待乙醇完全挥发后，开始录制下一只小鼠视频。

小鼠悬尾实验箱，上海欣软

旷场试验(open field test，OFT)

实验前1h将小鼠放入行为室适应，提前调节好旷场录制光照强度、录像设备，清洁旷场底部。旷场装置为50cm×50cm×40cm无盖箱体，实验开始时将小鼠轻轻放入箱内底面中央区，拉好四周围帘，同时进行录像和计时(10min)，保持录制期间处于安静环境。在两次测试之间，用乙醇彻底清洁箱体内壁和底部，去除上只小鼠残留气味，待乙醇完全挥发后，测试下一只小鼠。旷场测试完毕后，使用软件进行视频分析，主要测量参数为小鼠在旷场中央区活动的距离和时间及活动总距离和时间。

大小鼠旷场实验箱，型号：XR-XZ301

高架十字迷宫实验(elevated plus maze，EPM)

实验前1h将小鼠放入行为室适应，提前调节好高架录制光照强度、录像设备，清洁高架十字臂。高架装置是由一个中央区和两个相互垂直的开臂和两个闭臂组成的迷宫。实验开始时将小鼠轻轻放置在中央区，确保小鼠头部朝向开臂，拉好四周围帘，同时进行录像和计时(5min)，保持测试一直处于安静环境。在两次测试之间，用乙醇彻底清洁高架十字臂内部，去除上只小鼠残留气味，待乙醇完全挥发后，测试下一只小鼠。高架测试完毕后，使用软件进行视频分析，主要测量参数为小鼠在开臂活动的距离和时间及活动的总距离和时间。

Fig1 CRS模型后行为分析

机械痛与热痛阈值检测

将待测小鼠于实验前0.5～1.0h放置于金属网格(0.3cm×0.3cm)上方有机玻璃盒中适应，待小鼠适应盒内环境并保持相对安静后用vonFrey纤维丝测定小鼠后足中央区。vonFrey纤维丝是由一组从小到大排列的强度不同的纤维丝构成。本次实验从最小值0.008g开始检测，测试过程保持用力均匀，纤维丝呈弯曲状态，保持至少1s时间。观察小鼠是否出现缩足、舔足及抬足反应，如果有则标记为阳性，重复测定5～10次，每次间隔时间为3～5min。将阳性反应率为50%对应的克数作为疼痛反应阈值。热辐射阈值检测前0.5～1.0h将小鼠放置于30℃恒温玻璃板上的有机玻璃盒中适应。采用Hargreaves热敏测试箱进行热痛阈的检测，实验前设定好灯泡热辐射强度和照射时间(≤20s)。待小鼠处于安静状态后，用灯泡产生的热辐射刺激小鼠足底中央皮肤，刺激的同时开始计时，直至小鼠出现缩足、舔足及抬足反应后停止照射，计为缩足反应时间。重复测定3～5次，每次间隔5min。求出缩足反应时间的平均值来表示小鼠足底皮肤热痛阈值。

新奇抑制摄食实验（Novelty suspended feeding test，NSFT）

小鼠禁食24h（饮水不限），测试开始前将小鼠置于新的环境中适应30min（与小鼠饲养环境及其他测试环境均不同）。在125×125×40cm测试箱内铺设约1cm厚干净垫料，在测试箱中间位置放置5粒饲料在一张滤纸（直径10cm）上。测试时将小鼠面向箱壁放入，记录小鼠5min内第1次摄食的潜伏期（摄食被定义为小鼠开始咀嚼食物，而不是简单地嗅或触摸食物）。5min内未进食者摄食潜伏期记录为5min。

糖水偏好实验(sucrose preference test, SPT)

用于检测小鼠的快感是否缺失,糖水偏好百分比下降表明小鼠出现抑郁状态。小鼠适应性饮用 2%糖水48 h,然后用纯水交换，12 h 后交换两瓶的位置，避免小鼠产生位置偏好,记录24 h内小鼠主动摄取糖水和纯水的量。糖水偏好百分比(sucrose preference)% =糖水消耗量/ (糖水消耗量+纯水消耗量)×100%。

糖水偏好测试仪，上海欣软