散斑血流成像专题⑭丨大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型制备

模型制备前将大鼠适应性饲养1周并将体重严格控制在250～280g的范围内，模型制备前12h大鼠禁食不禁水。模型制备过程中所涉及的手术器材及用作线拴的鱼线（直径：0.26mm）均进行高压灭菌处理或75%酒精浸泡消毒，鱼线整体长度为6cm，头端1mm做过蜡处理，从过蜡端算起，在鱼线18-22mm处用防褪色marker笔做好标记，防止模型制备过程中刺破血管并起到润滑作用。线拴法加以改良，制备大鼠右侧MCAO/R模型，通过腹腔注射10%水合氯醛（300mg/kg）进行麻醉，将大鼠固定在手术台上，颈部剔毛处理，术中大鼠保持自主呼吸，恒温加热板维持其体温在36.5～37.5℃之间。

手术全程采用激光多普勒组织血流仪监测大鼠脑血流情况，碘伏消毒后颈正中做5cm纵行切口，经钝性分离后，暴露其右侧颈总动脉（commoncarotidartery，CCA）、颈外动脉（externalcarotidartery，ECA）及颈内动脉，眼科镊小心分离与CCA与ECA伴行的迷走神经，于近心端结扎CCA后，用微动脉夹阻闭CCA分叉处以及ECA近心端血流，此时在CCA中央处打一活结备用，再用1ml注射器针头在CCA活结下方1cm处斜刺一个小口，插入头端过蜡的鱼线，将活结拉紧固定鱼线在血管内，并松开动脉夹将鱼线插入颈内动脉后继续插入，稍遇阻力即可停止，此时鱼线已到达大脑中动脉起始端，插入深度约18-22mm，最后固定线栓，将ECA近心端结扎后碘伏消毒，逐层缝合，将多余的鱼线剪掉，留有一段在皮肤外做再灌注处理。缺血120min后拉出栓线尾端恢复灌注。术后大鼠单笼饲养，白炽灯照射维持其肛温在36～37℃，直至动物苏醒恢复活动，并给予正常饮水，以及用水泡发的鼠粮。假手术组大鼠不插入鱼线，不结扎CCA与ECA，其余操作相同。手术前，将激光多普勒探头置于右侧大脑中动脉供血皮质区域（前囟点向后2mm，正中缝侧方3-4mm），此时测得的脑血流相对灌注单位设为基线值100%；缺血操作完成后，激光多普勒探头测定脑血流相对灌注单位小于20%基线值视为缺血成功；缺血120min后拉出栓线尾端恢复灌注，激光多普勒探头测定脑血流灌注恢复至50%以上视为再灌注成功。不合格及死亡大鼠随即剔除，另选大鼠补

新一代激光散斑血流成像仪，型号：XR-X01，上海欣软

纳入标准：

再灌注2h及大鼠苏醒后，对所有MCAO模型大鼠进行评分，有研究的5分制神经功能缺损评分法，其中0分及5分大鼠淘汰，1分、2分及3分大鼠纳入实验，淘汰大鼠另选大鼠补充。

                                     表1 Longa神经功能缺损评分法

Fig1模型成功示意图（A：1分，B：2分，C：3分）

再灌注12h，1d，3d，7d，采用改良神经功能缺损评分（modifiedneurologicalseverityscores，mNSS）标准评估各组大鼠神经功能缺损和情况及采用大小鼠抓力测定仪对大鼠的前肢抓握力量进行测定，随后取材进行相应检测。取材过程中死亡或不合格大鼠另选大鼠补充。

mNSS评估神经功能缺损程度

再灌注12h，1d，3d，7d，采用mNSS标准评估各组大鼠的神经功能缺损情况。mNSS标准评分范围为0-18分，分值越高表示大鼠神经功能缺损情况越严重，其中重度神经功能缺损为13~18分，中度神经功能缺损为7~12分，轻度神经功能缺损为1~6分，正常为0分。该评分由两名不知道实验分组的实验人员配合完成，模型制备前各组大鼠进行2次mNSS测试适应性训练。

大鼠前肢抓握力量测试

术前1d及再灌注12h，1d，3d，7d，采用大小鼠抓力测定仪对大鼠的前肢抓握力量进行测定，测试者一手提起待测定大鼠的尾部，将其置于抓力仪测定区域，当测试者向后拉大鼠尾部时，大鼠试图抓紧抓力测定仪横杆以免从横杆脱落，这时测试者继续向后拖拽大鼠，直至大鼠滑脱，同时测定仪显示出大鼠此次的前肢抓握力量（g）,每只大鼠测试2次，最终取最大值作为最后数据。

阅读原文