【科技前沿】胡俊杰团队介绍一种通过差速离心和免疫共沉淀技术分离纯化酵母细胞管状内质网组分的方法

Biophysics Reports 2024年第2期发表了中国科学院生物物理研究所胡俊杰研究员，颜冰博士为共同通讯作者、研究生刘益多为第一作者的文章“Enrichment of ER tubule-derived microsomes by differential centrifugation and immunoprecipitation”，详细介绍了一种通过差速离心和免疫共沉淀技术分离纯化酵母细胞管状内质网组分的方法。

内质网是真核细胞中最大的细胞器，具有连续动态的网络结构，承担着很多重要的生命功能，如：蛋白质合成与修饰、脂质合成、钙离子储存等。同时，内质网可以同细胞内多种细胞器发生相互作用，介导细胞器之间的物质转运、能量传递和信息交流。形态上，内质网分为片状和管状。片状内质网呈扁平囊状，膜曲度较小，通常分布于核周；管状内质网通常为纵横交错的圆柱状网络结构。近年来，对管状内质网膜形成和膜融合的分子机制有了较为深入的了解，但对管状内质网的特异性生理功能仍缺乏深入的研究。

微粒体是细胞匀浆破碎后产生的囊泡，主要来自内质网。以往的研究已经建立了基于差速离心分离微粒体形式的内质网组分的方法，并广泛用于内质网生物学功能的体外研究。胡俊杰团队通过分离酵母管状内质网组分，并结合定量蛋白质组学方法，鉴定了79个管状内质网富集的蛋白，为后续管状内质网生理功能的研究打下了基础。

在本文中，作者详细描述了通过差速离心和免疫共沉淀技术，特异性分离纯化管状内质网组分的方法。首先，他们在酵母中表达带Flag标签的管状内质网标记蛋白Yop1p，然后用差速离心的方法分离内质网来源的微粒体。随后，在无去垢剂的实验体系下，通过免疫沉淀的方法特异性分离管状内质网特异性来源的微粒体组分。微粒体的分离纯化效率可以通过Percoll密度梯度实验和电镜负染实验进行评估。纯化的管状内质网微粒体可进一步用于蛋白质组学或脂质组学分析，以鉴定管状内质网富集的蛋白质或脂质，这将有助于了解管状内质网的生物学功能。此外，该方法经适当优化后，也可用于其它细胞器或亚细胞结构的分离和纯化。

图1 基于差速离心和免疫共沉淀分离管状内质网组分的实验流程图

文章链接：doi: 10.52601/bpr.2023.230031

本文转载自公众号“Biophysics Reports”

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原标题：《【科技前沿】胡俊杰团队介绍一种通过差速离心和免疫共沉淀技术分离纯化酵母细胞管状内质网组分的方法》

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