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散斑血流成像专题③丨激光多普勒血流应用之小鼠下肢缺血模型

2024-05-30 16:39

来源：澎湃新闻·澎湃号·湃客

下肢缺血性疾病是由下肢动脉狭窄或闭塞所致的严重的肢体血液循环障碍，可引起溃疡、坏疽、跛行等症状，致残率、病死率高。缺血区血管新生不足是缺血性疾病的主要病理改变，因此促进血管新生、恢复血供是实现损伤修复的关键。

实验方法

小鼠下肢缺血模型的建立

4周龄雄性ApoE基因敲除小鼠84只和4周龄雄性C57野生小鼠42只，购入后适应性饲养1周。观察小鼠状态良好后，ApoE基因敲除小鼠和C57野生小鼠，分别以高脂饮食和正常饲料喂养。饲养环境为恒温21～22°Ｃ，湿度55％～65％，同时保持安静通风，所有小鼠自由食水，12h昼夜节律。喂养4周后，采用改良缩窄股动脉法复制小鼠右下肢动脉慢性缺血模型。

具体方法如下：在室温（22℃）条件下，给予小鼠10％水合氯醛（3ml／kg）腹腔注射麻醉后，仰卧固定于手术台上，用酒精消毒皮肤，并剪开2～2.5cm的纵形切口。在大腿表面可看到一条红色血管，循向上血管隐没，在隐没处剪开1个小口，向下沿着血管剪开1cm，根据血管走形再向上剪开1.5cm。分离显露游离股动脉，4－0丝线结扎时连同7号细注射器系牢后抽出注射器针头，缝合切口。C57野生小鼠只切开并分离动静脉后缝合，不结扎缩窄，作为假手术组。ApoE基因敲除小鼠右下肢动脉缩窄术后进行激光多普勒血流测定，散光强度降低而不消失则造模成功。评价模型成功后，将ApoE基因敲除小鼠编号，随机分为模型对照组和黑参煎剂组，每组42只。正品人参炮制后制成黑参，煎煮后浓缩，黑参煎剂组取0.5ml／次，每日灌胃1次，模型对照组和假手术组取0.9％氯化钠溶液，0.5ml／次，每日灌胃1次，连续灌胃14d。

下肢缺血症状观察与评价

利用体式显微镜观察小鼠后肢外观（脱毛、趾甲增厚、坏死）评分。评分标准：0分表示无坏死；1分表示1个脚趾坏死；2分表示2个或多个脚趾坏死；3分表示出现足坏死；4分表示下肢有坏死；5分表示是整个大腿自行离断。注意并记录周边红肿情况。

激光多普勒检测小鼠缺血下肢血流灌

术前及术后即刻、7、14、21、28d行激光多普勒扫描，观察小鼠下肢血流灌注情况。各组小鼠下肢缺血症状评分比较观察发现，下肢缺血模型建立以后，小鼠右下肢出现无法站立、步态异常等行为表现。假手术组右下肢无任何异常现象，模型对照组与黑参煎剂组右下肢足部出现不同程度发黑、坏死，其中黑参煎剂组的症状优于模型对照组。各组小鼠右下肢缺血症状评分比较，差异有统计学意义。与假手术组相比，模型对照组与黑参煎剂组右下肢缺血症状评分均高，差异有统计学意义，提示下肢缺血模型构建成功。与模型对照组相比，黑参煎剂组下肢缺血症状评分低。

高脂喂养的黑参煎剂组和模型对照组，右后肢动脉结扎缩窄手术结束即进行多普勒检测，结果显示术侧基本无血流灌注，对侧血流灌注良好，表明造模成功。术后即刻、7、14、21、28d进行激光多普勒检测，监测小鼠右后肢血流变化情况，黑参煎剂组术后下肢血流恢复情况优于模型对照组。